Ознакомление с микротехникой. Правила работы с микроскопом


Целевая установка.

1.    Ознакомиться с основными этапами изготовления гистологического препарата, понять значение каждого из них.

2.    Запомнить названия и назначение частей микроскопа, усвоить приемы использования для изучения гистологических препаратов.

При изучении курса гистологии постоянными атрибутами являются гистологический препарат и микроскоп. Поэтому надо прежде всего ознакомиться с этапами изготовления гистологического препарата, устройством микроскопа и правилами работы с ним.

Гистологический препарат – это тонкий срез, заключенный между предметным и покровным стеклами. Он должен отвечать двум основным требованиям: 1. быть прозрачным; 2. быть контрастным.

Гистологические препараты бывают временные и постоянные. Первые предназначены для однократного изучения, а вторые могут сохраняться длительное время и подвергаться исследованию многократно.

Для изготовления препарата объект подвергается длительной обработке, включающей фиксацию, уплотнение и обезвоживание, заливку, изготовление срезов, окраску срезов и их заключение.

Для фиксации применяют жидкости различного состава, в которые входят формалин, спирт, различные соли и кислоты. Фиксируемый кусочек должен быть небольшим (размером 0,5 х 0,5 см, толщиной 2-3 мм), объем фиксирующей жидкости должен в 20-30 раз превосходить объем фиксируемых кусочков. Продолжительность фиксации зависит от особенностей фиксатора, величины кусочка и температуры.

Уплотнение состоит в проведении кусочка через ряд спиртов возрастающей крепости, что ведет к постепенному лишению тканей воды, так как вещества, употребляемые для заливки, не смешиваются с водой. При уплотнении кусочек проводится последовательно через 50, 60, 70, 80,90, 96 и 100 % спирт.

После обезвоживания кусочки заливают в такую среду, которая сделает их настолько плотными, что будет возможно получение тонких срезов. Для заливки используют целлоидин, парафин, желатин.

Для изготовления срезов применяют микротом. При помощи микротома получают настолько тонкие срезы, что они оказываются прозрачными, и после соответствующей обработки их можно изучать при помощи светового микроскопа.

Окрашивание срезов позволяет выявить различные части клеток и тканей, окрасив их специальными красками. Основные красители окрашивают ядро, кислые красители красят всю цитоплазму клетки. Нейтральные краски – это смеси кислого и основного красителя. Часто применяют сложные кислые красители, окрашивающие разные части клетки и ткани в различные цвета.

Для заключения срезов пользуются канадским или пихтовым бальзамом. Для временного препарата используют глицерин.

Световая микроскопия – основной метод анализа строения животных и растительных клеток и тканей.

В микроскопе различают: основание штатива, колонку штатива, микрометрический и макрометрический винты, столик микроскопа, винт конденсора, конденсор с ирисовой диафрагмой, головку тубусодержателя, наклонный тубус, револьверную систему, окуляр, объективы, зеркало. Увеличение объекта определяется произведением увеличения, даваемого объективом на увеличение, даваемое окуляром. Только объектив увеличивает объект, а окуляр лишь растягивает изображение, даваемое объективом. Поэтому для получения большего увеличения надо использовать сильный объектив, а не окуляр.

Задание 1. Депарафинировать и окрасить срез гематоксилин-эозином.

  1. Ксилол 1 - 5 минут
  2. Ксилол 2 - 5 минут
  3. Спирт 96º - 2 минут
  4. Спирт 70º - 2 минут
  5. Вода дист. - 2 минут
  6. Гематоксилин - 2 минут
  7. Вода дист. сполоснуть
  8. Вода водопроводная
  9. Эозин - 2 минут
  10. Спирт 70º - 1 минут
  11. Спирт 96º - 1 минут
  12. Карбол-ксилол - 1 минут
  13. Ксилол - 1 минут
  14. Бальзам (глицерин)
  15. Покровное стекло.

Задание 2. Перепишите в рабочую тетрадь правила работы с микроскопом и постарайтесь усвоить их.

  1. При слабом объективе установить зеркало так, чтобы поле зрения было освещено равномерно и достаточно ярко. Источник света настольная лампа. Зеркало вогнутое.
  2. Поместить препарат на предметный столик покровным стеклом к верху.
  3. Движением макровинта (кремальеры) найти фокус (расстояние между линзой слабого объектива и предметным столиком около 1 см).
  4. Рассмотреть препарат при малом увеличении. Найти участок препарата нужный для детального изучения и поставить его в центр поля зрения.
  5. Не меняя фокус, с помощью револьвера установить большой объектив (контроль – щелчок засечки револьвера).
  6. Глядя в окуляр, осторожно двигайте микровинт до появления четкого изображения.
  7. Рассматривая препарат при большом увеличении, необходимо легким движением микровинта сохранять изображение в фокусе. Рекомендуем смотреть в окуляр левым глазом при открытом правом (не следует прищуривать его).
  8. После окончания изучения и зарисовки препарата поднять тубус, перевести револьвер на малое увеличение и только тогда снять препарат с предметного столика.
  9. После изучения всех препаратов на данном занятии микроскоп с установленным слабым объективом закройте салфеткой и колпаком и продвиньте вглубь стола. Препараты уложите на планшетки.

Контрольные вопросы

  1. В чем заключается цель фиксации гистологического материала?
  2. Назовите способы уплотнения гистологического материала?
  3. Какими приемами микротехники достигаются прозрачность и контрастность препарата?
  4. Расскажите устройство микроскопа, его механические и оптические части.